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Effects of Oja-Shingiwhan in Contracted Corpus Cavernosum Smooth Muscle
Effects of Oja-Shingiwhan in Contracted Corpus Cavernosum Smooth Muscle
Journal of Physiology & Pathology in Korean Medicine. 2016. Oct, 30(5): 308-313
Copyright © 2016, The Korean Association of Oriental Medical Physiology
  • Received : July 25, 2016
  • Accepted : September 05, 2016
  • Published : October 25, 2016
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정수, 박
상현, 안
선영, 박
blbee@semyung.ac.kr

Abstract
The purpose of this study is to investigate the effects of Oja-Shingiwhan(OS) in contracted corpus cavernosum smooth muscle and its mechanism. To evaluate the relaxation of OS in contracted corpus cavernosum, OS was treated in strips which were precontracted with phenylephrine(PE). To examine its mechanism, OS was treated into corporal strips contracted by PE after pretreatment of Nω-nitro-L-arginine(L-NNA) and compared with non-pretreatment of L -NNA. In calcium chloride(Ca 2+ )-free krebs solution, Ca 2+ 1 mM was treated into corporal strips contracted by PE after pretreatment of OS and compared with non-pretreatment of OS. action were measured by histochemical, immunohistochemical methods. OS significantly affected on the relaxation of corporal strips, and the relaxation effects were inhibited by pretreatment of L-NNA. Contractions induced by Ca 2+ influx were inhibited by pretreatment of OS in Ca 2+ -free krebs solution. OS increased eNOS positive reaction in corpus cavernosum, but decreased PDE-5 positive reaction. These result suggest that the effect of OS in contracted corpus cavernosum smooth muscle are shown by suppressing extracellular Ca 2+ influx and increase of eNOS, NO production and decrease of PDE-5.
Keywords
서 론
인체의 생장과 발육은 腎氣에 바탕을 두고 이루어지기 때문에 腎氣의 쇠약은 육체적 기능이 쇠약하게 되는 근본적인 원인에 해당한다. 특히 腎氣의 쇠약은 남녀의 생식기능 감퇴와 성기능 장애까지 유발하는 원인이 되고 있다 1) . 따라서 腎氣 또는 腎精의 補益이 인체의 성장을 촉진시키고, 難姙이나 성기능 장애를 개선하기 위한 치법으로 많이 활용되고 있다 2) .
腎氣를 보충하는 대표적 처방인 腎氣丸은 東醫寶鑑 虛勞門 腎虛藥에 기재되어 있는 처방으로 3) , 虛勞로 인한 腎의 손상을 치료하고 腎水를 생성시키는 효능이 있어 腎虛로 인한 여러 질환의 치료에 활용되고 있다.
특히 腎氣丸이 생식기능과 성기능에 미치는 영향에 대하여, 신 등 4) 은 腎氣丸이 평균 배란 난자 수 및 정상 난자 수를 증가시키고, 수정란 초기 발생률을 증가시키는 경향이 있다고 보고하였고, 서 등 5) 은 腎氣丸이 정자생성을 촉진시키고, 음경해면체 평활근의 수축에 대하여 농도 의존적 평활근 이완작용이 있음을 보고하였으며, 신 등 6) 은 腎氣丸이 남성 갱년기 증후군 의심환자에서 신체적, 정신적 증상 및 성기능 장애를 개선시키는 효능이 있다고 보고한 바 있다.
이러한 연구 결과는 腎氣의 補益을 통하여 신체의 老化나 虛弱으로 인하여 발생하는 생식기능이나 성기능 장애를 개선할 수 있다는 것을 증명한 것으로 판단된다.
또한 五子에 속하는 약물 중 菟絲子는 陰精을 보충하며 수명을 연장시키는 효능, 枸杞子는 虛勞를 제거하며 精氣를 보충하고 노화를 방지하는 효능, 覆盆子는 腎精의 부족을 보충하고 陰痿를 치료하는 효능, 車前子는 陰精을 보충하고 노화를 방지하는 효능, 五味子는 陰精을 보충하고 虛勞를 치료하는 효능 7) 이 있어 腎氣나 腎精의 虛損으로 인한 질병에 활용할 가치가 충분하다.
최근 평균 수명의 증가에 따라 중장년층과 노년층 인구가 차지하는 비율이 증가하고 있고, 이와 함께 신체 노화에 동반된 다양한 질병의 발생이 증가하고 있다. 특히 남성 갱년기나 발기부전 역시 노화와 관련하여 발생되는 질환의 하나로 볼 수 있으며, 기존의 연구결과를 볼 때 腎氣丸을 활용한 치료법이 효과적일 수 있을 것으로 생각된다.
이에 저자는 한의약의 발기부전 치료 역시 위의 기전을 통하여 작용할 가능성이 많을 것으로 예상하여, 腎氣丸에 腎精의 補益에 활용되는 五子, 즉 菟絲子, 枸杞子, 覆盆子, 車前子를 加味한 五子腎氣丸이 수축된 음경해면체에 미치는 영향과 작용기전에 대한 연구를 통하여 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
재료 및 방법
- 1. 실험동물
체중 2 kg 정도의 New zealand white 수컷 토끼(샘타코, 한국)와 10주령의 Sprague Dawley Rat(샘타코, 한국)를 사용하였다. 실험동물은 고형사료와 물을 충분히 섭취하게 하면서 1주일간 실험실 환경에 적응시킨 후 사용하였다.
본 동물실험은 세명대학교 동물실험윤리위원회의 승인(smecac 15-06-04)을 거쳐 실시하였다.
- 2. 五子腎氣丸 추출물 제조
五子腎氣丸(Oja-Shingiwhan, OS) 7첩(630 g)에 증류수 3000 ㎖을 가하여 3시간 동안 가열 추출하였다. 추출액을 rotary evaporator(Eyela, Japan)로 감압 농축한 후 동결건조기로 건조하여 분말 81 g을 제조하였다.
Prescription of Oja-Shingiwhan per Pack
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Prescription of Oja-Shingiwhan per Pack
- 3. 음경해면체 이완효과 측정
- 1) 해면체절편의 제작
토끼를 chloral hydrate(0.6 g/㎏, 정맥주사)로 마취한 다음 음경을 적출하여 4℃의 modified krebs-ringer bicarbonate solution(NaCl 125.4, KCl 4.9, CaCl 2 2.8, MgSO 4 1.2, NaHCO 3 15.8, KH 2 PO 4 1.2, glucose 12.2 mM, pH 7.4)에 담았다. 음경 주위의 지방조직과 백막을 제거한 후 2×2×6 ㎜ 크기의 음경절편을 제작하여 실험에 사용하였다.
- 2) 등장성 수축 측정
혼합가스(95%의 O 2 와 5%의 CO 2 )로 포화된 37℃의 modified krebs solution을 peristaltic pump를 통하여 3 ㎖/min의 용량으로 organ bath(용량 1.5 ㎖)에 흘려주었다. 음경절편의 한쪽 끝은 organ bath의 바닥에 고정시키고 다른 쪽은 force transducer에 연결한 후 physiograph(PowerLab, Australia)에서 장력의 변화를 측정하였다.
실험을 시작하기 전에 음경절편을 1시간 안정시키고 micromanipulator(Narishige N 2 , Japan)를 이용하여 1.5 g의 피동장력을 가하였다. 다시 1시간 안정시키고 실험을 진행하였으며, 연속실험인 경우 후속 처치 전에 다시 1시간 안정시키고 실험을 진행하였다. 본 실험 전 phenylephrine(PE, 10 -6 M)으로 수축시키고 acetylcholine(10 -6 M)을 투여하였을 때 정상적 이완반응을 나타내는 절편만 실험에 사용하였다.
- 3) 五子腎氣丸의 음경해면체 이완효과와 작용기전 검증
음경절편을 PE로 수축시키고 五子腎氣丸 추출물을 농도별(0.01, 0.03, 0.1, 0.3, 1, 3 ㎎/㎖)로 투여하여 이완 정도를 기록하였다. 이완기전 연구를 위하여 음경절편에 Nω-nitro-L-arginine( L -NNA, 10 -4 M)을 15분간 처치한 다음 PE로 수축시키고 五子腎氣丸 추출물을 농도별(0.1, 0.3, 1, 3 ㎎/㎖)로 투여하여 이완 정도를 기록하였고, L -NNA를 전처치하지 않았을 때와의 이완 정도를 비교하였다.
五子腎氣丸의 이완효과에서 세포외 Ca 2+ 유입이 미치는 영향을 검증하기 위하여 Ca 2+ -free solution에서 음경절편에 PE를 투여하여 수축시킨 후 Ca 2+ (1 mM)을 투여하여 수축의 변화를 기록하였다. 동일한 음경절편을 1시간 회복시킨 후 五子腎氣丸 추출물(3 ㎎/㎖)을 10분간 처치한 다음 PE로 수축시키고 Ca 2+ (1 mM)을 투여하여 수축의 변화를 기록하였고, 五子腎氣丸을 처치하지 않은 경우와 비교하였다.
- 4. 음경해면체 조직학적 변화 측정
- 1) 음경해면체 조직표본 제작
흰쥐를 ether로 마취한 후 음경을 적출하여 4℃의 modified krebs-ringer bicarbonate solution(NaCl 125.4, KCl 4.9, CaCl 2 2.8, MgSO 4 1.2, NaHCO 3 15.8, KH 2 PO 4 1.2, glucose 12.2 mM, pH 7.4)에 담았다. 음경 주위의 지방조직을 제거하고 2 ㎜ 두께로 절단한 음경절편을 정상인 대조군과 PE(10 -6 M)를 10분간 처리한 PE군, PE(10 -6 M)와 五子腎氣丸(3 ㎎/㎖)을 함께 10분간 처리한 PE+OS군으로 구분하였다. 제작된 음경절편은 실온에서 10% NBF에 24시간동안 고정하였다. 고정된 조직은 통상적인 방법으로 paraffin에 포매한 다음 3 ㎛ 두께의 연속절편으로 제작하였다.
- 2) 음경해면체 조직화학
음경해면체에 분포하는 평활근과 아교섬유의 분포를 관찰하기 위하여 Masson trichrome 염색을 실시하였다. 우선 50~60℃ Bouin 용액에서 1시간동안 매염 처리한 다음 70% 에탄올에서 picric acid를 제거하였다. Weigert iron hematoxylin에서 10분 동안 반응시켜 핵을 염색하고, Biebrich scalet-acid fuchsin와 phosphomolybdic-phosphotungstic acid에서 각각 15분간, aniline blue에 5분간 처리하여 평활근(적색)과 아교섬유(청색)를 염색하였다. 음경해면체내 아교섬유에 대한 평활근의 분포비율을 계산하기 위하여 광학현미경(BX50. Olympus, Japan)을 이용한 영상분석을 실시하였다.
- 3) 음경해면체 면역조직화학
음경해면체의 endothelial nitric oxide synthases(eNOS)와 phosphodiesterase5(PDE5)의 분포를 관찰하기 위하여 면역조직화학적 염색을 실시하였다. 음경절편을 proteinase K(20 ㎍/㎖)에서 5분간 proteolysis 과정을 거친 다음 blocking serum인 10% normal goat serum에서 2시간 동안 반응시켰다. 그 다음 4℃ humidified chamber에서 1차 항체인 mouse anti-eNOS(1:100, Santa Cruz Biotec)와 mouse anti-PDE(1:100, Santa Cruz Biotec)에 72시간 동안 반응시켰다. 다시 2차 항체인 biotinylated goat anti-mouse IgG2a(1:100, DAKO, USA)에 실온에서 24시간 link 하였고, 다음 avidin biotin complex kit(Vector Lab, USA)에 1시간동안 실온에서 반응시켰다. 0.05% 3,3'-diaminobenzidine과 0.01% HCl이 포함된 0.05M tris-HCl 완충용액(pH 7.4)에서 발색시킨 다음, hematoxylin으로 대조염색 하였다. 음경해면체내 eNOS와 PDE5의 양성반응 정도를 영상분석을 통해 측정하였다.
- 5. 영상분석과 통계처리
음경해면체 수축변화는 실제 수축의 크기와 PE를 투여하여 유발된 최고 수축에 대한 백분율을 평균과 표준편차로 나타내었다. 조직화학과 면역조직화학의 결과는 Image pro Plus(Media Cybernetic, USA)를 이용한 영상분석(image analysis)을 실시하여 수치화하였다. 실험결과의 비교는 SPSS 20.0을 이용하여 one-way ANOVA를 시행하였으며, 사후검정은 Fisher의 LSD를 사용하였다.
결 과
- 1. 五子腎氣丸의 음경해면체 이완효과
五子腎氣丸은 PE-수축 음경절편에 대하여 1, 3 ㎎/㎖의 농도에서 각각 유의성 있는 이완효과를 나타내었다( Table 2 , Fig. 1 ).
The Effects of Oja-Shingiwhan in isolated strips of rabbit corpus cavernosum smooth muscle precontracted with PE
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Values are mean±standard deviation(n=8). OS extract-induced relaxation was expressed as percentage of PE-contraction. OS, Oja-Shingiwhan extract(㎎/㎖) ; ** p<0.01, *** p<0.001 compared with PE.
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The concentration-response curve of Oja-Shingiwhan in isolated strips of rabbit corpus cavernosum smooth muscle pre-contracted with PE. W/O, wash out or change of bath medium with a solution to which no drug is applied.
- 2.L-NNA의 전처치가 五子腎氣丸의 해면체이완효과에 미치는 영향
五子腎氣丸은 PE-수축 음경절편에 대하여, L -NNA를 전처치하지 않은 경우는 1, 3 ㎎/㎖의 농도에서 각각 유의성 있는 이완효과를 나타내었고, L -NNA를 전처치한 경우는 3 ㎎/㎖의 농도에서 유의성 있는 이완효과를 나타내었다.
그러나 L -NNA를 전처치한 경우는 L -NNA를 전처치하지 않은 경우에 비하여 五子腎氣丸의 이완효과가 0.3, 1, 3 ㎎/㎖의 농도에서 유의성 있게 억제되었다( Table 3 , Fig. 2 ).
Effects of pretreatment of L-NNA on the relaxation effects of Oja-Shingiwhan in isolated rabbit corpus cavernosum smooth muscle
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Values are mean±standard deviation(n=7). OS extract-induced relaxation was expressed as percentage of PE-contraction. ** p<0.01, *** p<0.001 compared with PE ; # p<0.05, ## p<0.01, ### p<0.001 compared with non treatment of L-NNA.
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Effects of pre-treatment of L-NNA on the relaxation effects of Oja-Shingiwhan in isolated rabbit corpus cavernosum smooth muscle.
- 3. 五子腎氣丸의 전처치에 따른 Ca2+의존성 수축의 변화
Ca 2+ 이 제거된 krebs-ringer solution에서 PE-수축 음경절편에 Ca 2+ 1 mM을 투여하였을 때 1.17±0.16 g의 수축을 나타내었으나, 五子腎氣丸을 전처치한 PE-수축 음경절편에 Ca 2+ 1 mM을 투여하였을 때는 0.95±0.14 g의 수축을 나타내어 五子腎氣丸이 Ca 2+ 유입에 따른 음경절편 수축의 증가를 유의성 있게 억제하였다( Table 4 , Fig. 3 ).
Effects of pretreatment of Oja-Shingiwhan on calcium-induced contraction of corpus cavernosal strip in calcium-free media.
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Values are mean±standard deviation(n=8). OS, Oja-Shingiwhan extract 3 ㎎/㎖ ; Ca, calcium chloride 1 mM ; # p<0.05 compared with PE+Ca in non treatment of OS.
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Effects of pretreatment of Oja-Shingiwhan on calcium-induced contraction of corpus cavernosal strip in calcium-free media.
- 4. 음경해면체 내 평활근 분포 변화
조직화학결과 아교섬유는 음경해면체 중심부와 가장자리 백색막 주변부에서 관찰되었다. 평활근은 음경해면체에 분포하는 아교섬유 사이공간에서 관찰되었다. 특히 PE+OS군에서는 음경해면체 중심부에 분포하는 아교섬유사이에서 많이 관찰되었다( Fig. 4 ).
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Results of Masson's trichrome stain in rat penises(×40). A, Control group ; B, PE group ; C, PE+OS group ; CCP, corpus cavernosum penis ; CSP, corpus spongiosum penis ; DOR, dorsal region of penis.
영상분석결과 음경해면체내 아교섬유에 대한 평활근의 분포비율은 control군에서는 1 : 0.071, PE군에서는 1 : 0.034, PE+OS군에서는 1 : 0.165로 나타났다.
- 5. 음경해면체 내 eNOS 분포
면역조직화학 결과 eNOS 양성반응은 음경해면체 중심부 주변의 평활근에서 관찰되었다. 영상분석결과 eNOS 양성반응은 PE군에 비해 PE+OS군에서 유의성있게 증가되었다( Table 5 , Fig. 5 ).
Analysis of eNOS positive reactions.
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Values are mean±standard deviation(n=6). Image analysis for 100,000,000 pixel cells. PE, penylephrine 10-6 M ; OS, Oja-Shingiwhan extract 3 ㎎/㎖ ; * p<0.05 compared with PE.
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Immunohistochemistry of eNOS in rat penises (×200). A, Control group ; B, PE group ; C, PE+OS group ; H, helicine artery in CCP ; S, Sinus in CCP ; SV, small vein ; Arrows indicate positive eNOS reactions.
- 6. 음경해면체 내 PDE-5 분포
면역조직화학 결과 PDE-5 양성반응은 음경해면체 중심부 주변의 평활근에서 관찰되었다. 영상분석결과 PDE-5 양성반응은 PE군에 비해 PE+OS군에서 유의성있게 감소되었다( Table 6 , Fig. 6 ).
Analysis for PDE-5 positive reactions.
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Values are mean±standard deviation(n=6). Image analysis for 100,000,000 pixel cells. PE, penylephrine 10-6 M ; OS, Oja-Shingiwhan extract 3 ㎎/㎖ ; * p<0.05 compared with PE.
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Immunohistochemistry of PDE in rat penises(×100). A, Control group ; B, PE group ; C, PE+OS group ; H, helicine artery in CCP ; S, Sinus in CCP ; SV, small vein ; Arrows indicate positive PDE-5 reactions.
고 찰
남성 생식기의 발기는 성적 자극에 의해 부교감신경이 활성화 되었을 때 분비되는 nitric oxide(NO)가 음경 해면체 평활근에서 cyclic guanylate monophosphate(cGMP)의 활성을 증가시키고 이에 따라 Ca 2+ -channel이 차단되고 이완된 혈관에 혈액이 충만되어 나타나는 결과이다 8 , 9) .
NO는 혈관내피세포에서 분비되는 혈관이완인자 중 하나로 Furchgott 등 10) 에 의해 혈관이완인자로서 처음 발견되었으며, 아미노산인 L-arginine으로부터 nitric oxide syntase(NOS)에 의해 합성된다 11) . undefined[. 또한 phosphodiesterase-5(PDE-5)는 cGMP를 분해하여 Ca 2+ -channel을 활성화]undefined 12) 시켜 혈관이 수축됨으로써 발기현상을 종료시키게 된다.
그러나 발기의 과정에서 이상이 있어 발기가 되지 않거나 발기가 되더라도 강직도가 유지되지 않을 경우 발기부전이 유발된다 13) . 발기부전의 기질적 원인으로 가장 많은 것은 혈관계의 이상이며, 그 외에 고혈압환자에서 사용되고 있는 많은 혈압강하제에 관련된 발기부전 및 고혈압 자체의 순환기계 장애, 고콜레스테롤증, 노화 등의 대사장애성 질환이 원인이 된다 14) .
한의학적으로 발기부전은 陰痿 또는 陽痿의 범주로 인식되고 있고, <景岳全書>에서는 “凡男子陽痿不起 多由命門火衰 精氣淸冷” 이라 하여 陽痿의 원인으로 腎虛를 제시하고 있으므로 15) , 腎氣의 쇠약을 성기능 장애의 원인으로 볼 수 있다 1) .
본 실험에서 사용한 腎氣丸은 <小兒藥症直訣>에 수록된 地黃丸 16) 에 五味子를 加한 처방으로 六味地黃丸이 腎水를 補充하고 調節하여 水分代謝를 정상화시키고 五味子가 肺金之氣를 補益하여 위로는 水源인 肺氣를 滋養하고 아래로는 補腎하는 작용을 함으로써 肺 및 腎氣의 虛弱으로 인한 질환에 많이 응용되고 있다 17) .
또한 五子丸은 菟絲子, 袧杞子, 覆盆子, 車前子, 五味子로 이루어진 처방으로, 菟絲子는 補不足 强陰 輕身延年 添精하고, 枸杞子는 耐老 去虛勞 補精氣하며, 覆盆子는 補虛 强陰健陽 腎精虛竭陰痿에 사용하고, 車前子는 耐老 强陰益精하며, 五味子는 勞傷羸瘦 補不足 强陰 益精 補虛勞하므로 7) 성기능 개선에 활용할 수 있는 약물이다.
위의 五子에 관한 연구로 김 등 18) 은 菟絲子가 생식세포인 spermatogonia (GC-1)와 spermatocyte (GC-2)의 생존율을 증가시키고 cyclophosphamide에 의해 유도된 생식 독성에 대하여 남성호르몬의 증가와 정자의 수 및 운동성을 증가시킨다고 보고하였고, 정 등 19) 은 枸杞子가 알코올로 유도된 발기부전 모델에서 iNOS의 증가를 억제하고 eNOS 발현을 활성화하여 알코올에 의한 발기능의 저하를 개선한다고 보고하였다. 또 박 등 20) 은 覆盆子 추출물이 내피세포 내에서 NO의 생성 및 NO에 따른 soluble guanylyl cyclase를 활성화 시켜서 cGMP의 농도증가로 세포외 Ca 2+ 의 유입을 막아 음경해면체 평활근을 이완시킨다고 보고하였고, 박 등 21) 은 車前子가 수컷 생쥐 정자의 무게, 수, 운동성의 증가와 혈중 testosterone 수치의 감소를 통해 남성 생식능력을 개선시킨다고 보고하였다. 유 등 22) 은 五味子가 cyclophosphamide에 의해 유도 된 생식계의 독성에 대하여 남성호르몬의 증가와 정자의 수, 운동성 증가에 영향을 주어 남성불임증의 치료에 응용될 수 있을 것이라 보고하여 五子는 腎기능의 개선에 효과가 있는 약물로 검증되었다.
이에 저자는 腎氣丸에 腎精의 補益에 활용되는 五子, 즉 菟絲子, 枸杞子, 覆盆子, 車前子를 加味한 五子腎氣丸이 남성의 성기능에 효과가 있을 것이라 예상하여, organ bath study와 면역조직화학적 방법을 통하여 수축된 음경해면체에 미치는 영향과 작용기전에 대한 연구를 진행하였다.
PE로 최대 수축시킨 음경해면체 절편에 五子腎氣丸을 농도별로 투여하였을 때 五子腎氣丸은 농도의존적으로 유의성 있는 이완효과를 나타내었으며 이를 통해 五子腎氣丸이 음경해면체를 이완시키는 효과가 있다는 것을 확인하였다.
또한 L -NNA를 전처치하지 않고 PE로 최대 수축시킨 음경해면체 절편에 五子腎氣丸을 투여한 경우와 L-NNA를 전처치한 후 五子腎氣丸을 투여한 경우를 비교하였을 때, L-NNA를 전처치하지 않는 경우에 비하여 L-NNA를 전처치한 경우에서 五子腎氣丸의 음경해면체 이완효과가 0.3, 1, 3 ㎎/㎖의 농도에서 유의하게 억제되어 나타났다.
L -NNA는 L-arginine으로부터 NO가 생성되는 과정을 저해하는 NOS inhibitor 23 , 24) L -NNA의 전처치로 인하여 五子腎氣丸의 음경해면체 이완효과가 억제되었다는 결과를 통하여 五子腎氣丸의 음경해면체 이완효과가 NO의 생성을 증가시키는 과정과 연관되어 있다는 사실을 알 수 있다.
세포외 Ca 2+ 이 음경해면체 이완에 미치는 영향을 알아보기 위하여 Ca 2+ 이 제거된 krebs-ringer solution에서 PE로 최대 수축시킨 음경해면체 절편에 Ca 2+ 1 mM을 투여한 결과와 五子腎氣丸을 전처치하고 PE로 수축시킨 후 Ca 2+ 1 mM을 투여한 결과를 비교하였다. 실험 결과 Ca 2+ 의 투여로 인한 수축의 증가는 五子腎氣丸의 전처치에 의하여 유의하게 억제되었다. 이는 五子腎氣丸이 Ca 2+ 의 유입을 차단시킴으로써 음경해면체 이완효과에 관여한 것으로 판단할 수 있다.
조직화학적 결과에서는 음경해면체 내 아교섬유에 대한 평활근의 분포비율이 PE군에 비하여 PE+OS군에서 증가되어 나타났으며, 이 결과는 五子腎氣丸이 평활근을 이완시킴으로써 평활근 분포 면적이 증가된 것으로 五子腎氣丸이 음경해면체 평활근에 대하여 이완효과를 나타낸다는 사실을 뒷받침해준다.
또한 면역조직화학 결과에서 eNOS 양성반응은 PE군에 비하여 PE+OS군에서 증가되어 나타났고 PDE-5 양성반응은 감소되어 나타났다. PE+OS군에서 eNOS 양성반응이 증가된 것은 五子腎氣丸이 NO의 생성과정을 통하여 음경해면체 이완효과를 나타낸다는 사실을 뒷받침해주는 결과로 볼 수 있다. PE+OS군에서 PDE-5 양성반응이 감소된 것은 cGMP를 분해하여 Ca 2+ -channel을 활성화 12) 시킴으로써 혈관을 수축시키는 PDE-5의 작용을 五子腎氣丸이 억제하여 음경해면체 이완효과를 나타낸다는 사실을 뒷받침해준다.
이상의 결과를 통하여 腎氣를 補하는 약물로 구성된 五子腎氣丸은 eNOS를 통한 NO의 생성을 증가시키고, PDE-5의 작용을 억제함으로써 세포외 Ca 2+ 의 유입을 차단시켜 음경해면체 평활근 이완효과를 나타낸다는 것을 알 수 있다.
결 론
五子腎氣丸의 남성 성기능 개선효과를 검증하기 위하여 수축 된 음경해면체에 미치는 영향과 작용기전에 대한 연구를 통하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
PE로 수축된 음경 해면체 절편에 五子腎氣丸을 투여하였을 때 1, 3 ㎎/㎖에서 각각 유의성 있는 이완효과를 나타내었다
L -NNA를 전처치한 경우는 L -NNA를 전처치하지 않은 경우에 비하여 五子腎氣丸 0.3, 1, 3 ㎎/㎖의 농도에서 음경해면체에 대한 이완효과가 유의성 있게 억제되었다
Ca 2+ 이 제거된 krebs-ringer solution에서 Ca 2+ 1 mM의 투여에 따라 수축이 증가되었으나, 五子腎氣丸의 전처치에 의해 Ca 2+ 의 첨가에 따른 수축의 증가는 유의성 있게 억제되었다.
조직화학적 결과 음경해면체내 아교섬유에 대한 평활근의 분포 비율은 control군에 비하여 PE+OS군에서 증가되어 나타났다.
면역조직화학적 결과 PE군에 비해 PE+OS군에서 eNOS 양성반응은 증가되었고 PDE-5 양성반응은 감소되었다
이상의 실험결과를 종합해 보면 五子腎氣丸은 eNOS 활성을 통하여 NO의 생성을 증가시키고, PDE-5의 활성을 억제하여 세포 외 Ca 2+ 의 유입을 차단함으로써 음경해면체 평활근 이완효과를 나타내므로 남성 성기능 개선에 활용할 수 있을 것으로 생각된다.
Acknowledgements
본 연구는 보건복지부의 재원으로 한국보건산업진흥원의 보건의료기술연구개발사업 지원에 의하여 이루어진 것임(HI16C-0469-010016)
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